Відповідно до штатного розкладу в Донськом козацькому полку мирного часу вважалося 36 офіцерів: командир полку (полковник), 2 помічника командира полку (військові старшини), завідувач господарством полку (військовий старшина), 6 сотених командирів (осаули) та 26 молодших офіцерів (під'єсаули, сот.
Відповідно до «Положення про Війську Донському» 1835 року Військо було поділено на чотири округи на чолі з окружними генералами. Козачі чини мали таку назву: козак, урядник, підхорунжий, хорунжий, сотник, під'єсаул, осавул, військовий старшина, підполковник і полковник.
Дослідження показало, що генетично донські козаки подібні до нанесення Південних областей Росії та України. Загалом козачий генофонд не відрізняється від східних слов'ян. Найбільша частка точних збігів із гаплотипами козаків у 8% виявлено у південноруській популяції.
На чолі Війська знаходився Військовий наказний отаман, який мав права генерал-губернатора з цивільної частини і командувача військ округу з військової. Він очолював військове управління, до якого входили Військовий штаб, управління Донської козацької артилерії та цивільне обласне управління Війська Донського.